Differenza chiave - Pagina SDS vs Western Blot
Il western blotting è una tecnica che rileva una proteina specifica da un campione di proteine. Questa tecnica viene eseguita attraverso diversi passaggi chiave: elettroforesi su gel, blotting e ibridazione. L'elettroforesi su gel di poliacrilammide di sodio dodecil solfato (pagina SDS) è una sorta di tecnica di elettroforesi su gel che viene utilizzata per separare le proteine in base alle loro dimensioni (pesi molecolari). Western blot è un foglio speciale di una membrana assorbente che viene utilizzato per trasferire lo stesso pattern delle proteine nella pagina SDS. La differenza fondamentale tra la pagina SDS e il western blot è che la pagina SDS consente la separazione delle proteine in una miscela mentre il western blot consente il rilevamento e la quantificazione di una specifica proteina da una miscela. Entrambi sono utili negli studi di analisi delle proteine.
INDICE
1. Panoramica e differenze principali
2. Che cos'è la pagina SDS
3. Che cos'è Western Blot
4. Confronto affiancato - Pagina SDS vs Western Blot
5. Riepilogo
Cos'è la pagina SDS?
La pagina SDS è una tecnica di elettroforesi su gel utilizzata per la separazione delle proteine. È comunemente usato in biochimica, genetica, medicina legale e biologia molecolare. Una volta che le proteine sono state estratte dal campione, vengono eseguite su un gel composto da SDS e poliacrilammide. SDS è un detergente anionico che viene utilizzato per linearizzare le proteine (denaturare le proteine) e per impartire una carica negativa alle proteine linearizzate proporzionale alla loro massa molecolare. Il poliacrilammide diventa il supporto solido per il gel. Le proteine denaturate che sono caricate negativamente migrano verso l'estremità positiva dell'apparato attraverso il gel. A seconda delle dimensioni delle proteine, le velocità di migrazione differiscono tra le proteine e avviene la separazione. Pertanto, la pagina SDS è utile per la separazione delle singole proteine in base alle loro dimensioni.
La preparazione del gel di poliacrilammide per il frazionamento delle proteine è un passaggio cruciale nella pagina SDS. La corretta concentrazione di poliacrilammide e il tipo di agente reticolante utilizzato influenzano fortemente le proprietà fisiche del gel, che effettua l'effettiva separazione delle diverse proteine. Le dimensioni dei pori del gel devono essere gestite adeguatamente per una separazione efficace. Tuttavia, la pagina SDS è considerata una tecnica di separazione delle proteine ad alta risoluzione.
La tecnica della pagina SDS ha una limitazione importante nell'analisi delle proteine. Poiché la SDS denatura le proteine prima della separazione, non consente il rilevamento dell'attività enzimatica, delle interazioni di legame delle proteine, dei cofattori proteici, ecc.
Figura 01: pagina SDS
Cos'è Western Blot?
La tecnica del Western blotting consente il rilevamento di una specifica proteina da una miscela proteica e la misurazione della quantità e del peso molecolare della proteina. Il Western blot è la membrana utilizzata durante la procedura di blotting per ottenere l'immagine speculare dei pattern proteici nel gel di poliacrilammide SDS. La membrana utilizzata per il western blotting è costituita principalmente da nitrocellulosa o polivinilidene difluoruro (PVDF). La membrana con la proteina trasferita può essere utilizzata per identificare la proteina desiderata. Richiede anticorpi di alta qualità per la rilevazione della proteina desiderata mediante ibridazione. L'anticorpo si lega al suo antigene specifico e rivela la presenza dell'antigene desiderato che è una proteina.
Il trasferimento delle proteine dal gel di poliacrilammide SDS al western blot viene eseguito mediante elettroblotting. È un metodo efficace e veloce che fa sì che le proteine si elettroforizzino fuori dal gel e passino sulla membrana di nitrocellulosa (western blot).
Figura 02: Western Blot
Qual è la differenza tra la pagina SDS e Western Blot?
Articolo diff. Al centro prima della tabella
Pagina SDS vs Western Blot |
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| La pagina SDS è una tecnica di elettroforesi su gel. | Il Western blot è una tecnica che viene eseguita su una membrana per rilevare una specifica proteina da una miscela. |
| Uso | |
| La pagina SDS consente la separazione delle proteine in base alle loro dimensioni. | Western blot consente il trasferimento di proteine sul gel della pagina SDS senza modificarne il pattern e consente l'ibridazione con anticorpi specifici. |
| Svantaggi | |
| La denaturazione delle proteine, il costo elevato e la presenza di neurotossine chimiche sono gli svantaggi di questa tecnica. | Questa tecnica richiede tempo e richiede una buona esperienza personale e specifiche condizioni controllate. |
Riepilogo - Pagina SDS vs Western Blot
La pagina SDS e il western blot sono due metodi coinvolti nell'analisi delle proteine. La pagina SDS consente una facile separazione delle proteine su un gel in base al loro peso molecolare. Il Western blot aiuta a confermare la presenza e la quantità di una specifica proteina attraverso l'ibridazione con specifici anticorpi. Questa è la differenza tra la pagina SDS e il western blot.
