Differenza chiave: ibridazione in situ vs immunoistochimica
La diagnostica del cancro e delle malattie infettive è una tendenza popolare in cui vengono utilizzate nuove tecniche basate sulla proteomica e sulla genomica allo scopo di identificare tumori o cellule infettive, la loro proliferazione e i siti di sviluppo cellulare e analizzare le basi genetiche della maggior parte delle malattie trasmissibili e non trasmissibili. Ciò si tradurrà in un'accurata elaborazione e progettazione dei farmaci e nello sviluppo di terapie personalizzate per le malattie. L'ibridazione in situ (ISH) e l'immunoistochimica (IHC) sono due tecniche ampiamente utilizzate nella biologia del cancro e la differenza fondamentale tra ibridazione in situ e immunochimica risiede nelle molecole utilizzate nella procedura di analisi. In ISH, le sonde di acido nucleico vengono utilizzate in analisi mentre, in IHC, vengono utilizzati anticorpi monoclonali e policlonali per le determinazioni diagnostiche.
CONTENUTI
1. Panoramica e differenza chiave
2. Che cos'è l'ibridazione in situ
3. Che cos'è l'immunoistochimica
4. Somiglianze tra ibridazione in situ e immunoistochimica
5. Confronto affiancato - Ibridazione in situ vs immunoistochimica in forma tabulare
6. Riepilogo
Che cos'è l'ibridazione in situ (ISH)?
L'ibridazione in situ è una tecnica di ibridazione degli acidi nucleici che viene eseguita direttamente su una porzione o sezione di tessuto, nell'intero tessuto o nelle cellule. La tecnica dipende dalla teoria dell'accoppiamento di basi complementari di Watson Crick, risultante in ibridi DNA-DNA o ibridi DNA-RNA in grado di rilevare geni mutati o identificare il gene di interesse richiesto. Le sequenze di DNA a filamento singolo, le sequenze di DNA a doppio filamento, le sequenze di RNA a filamento singolo o le sequenze di oligonucleotidi sintetici vengono utilizzate come sonde durante la tecnica di ibridazione e queste sonde sono etichettate con un fosforo radioattivo all'estremità 5 'per le procedure di identificazione su autoradiografia o etichettate utilizzando coloranti fluorescenti. Sono disponibili diversi tipi di tecniche ISH in base al tipo di sonda utilizzata e al tipo di tecnica di visualizzazione seguita.
Figura 01: ibridazione in situ fluorescente
Esistono molte applicazioni dell'ISH, principalmente nella diagnostica molecolare delle malattie infettive al fine di identificare la presenza di agenti patogeni e per confermare l'agente patogeno attraverso la diagnostica molecolare. Viene anche utilizzato nei campi della biologia dello sviluppo, del cariotipo, dell'analisi filogenetica e della mappatura fisica dei cromosomi.
Cos'è l'immunoistochimica (IHC)?
Nella tecnica dell'IHC, la principale molecola analizzata è l'antigene. Durante l'IHC, vengono utilizzati anticorpi monoclonali e policlonali per determinare la presenza di antigeni in caso di infezione o stato di proliferazione cellulare maligna. La tecnica si basa sul legame antigene-anticorpo e per questa tecnica vengono utilizzate etichette enzimatiche; una di queste applicazioni è l'ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay). I marcatori possono anche essere anticorpi marcati con fluorescenza o anticorpi marcati con radio.
Figura 02: immunoistochimica
L'IHC è ampiamente utilizzato per il rilevamento delle cellule tumorali. Le procedure diagnostiche mirano agli antigeni presenti sulle cellule tumorali per identificare e caratterizzare il tumore. La stessa procedura è incorporata per diagnosticare agenti infettivi. Gli anticorpi monoclonali e policlonali vengono anche utilizzati per analizzare diversi prodotti genici consentendo la reazione di legame anticorpo-antigene tra la proteina desiderata e l'anticorpo sintetico somministrato.
Quali sono le somiglianze tra ibridazione in situ e immunoistochimica?
- ISH e IHC sono reazioni altamente specifiche.
- Entrambe le tecniche sono estremamente accurate.
- Entrambe le tecniche possono essere utilizzate nella diagnostica del cancro e delle malattie infettive.
- Queste tecniche vengono eseguite in ambienti sterili in vitro.
- Entrambe sono tecniche rapide che forniscono risultati riproducibili.
- ISH e IHC utilizzano metodi di rilevamento come l'etichettatura radio e le tecniche di fluorescenza.
Qual è la differenza tra ibridazione in situ e immunoistochimica?
Articolo diff. Al centro prima della tabella
Ibridazione in situ vs immunoistochimica |
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| ISH è una tecnica di ibridazione degli acidi nucleici che viene eseguita direttamente su una porzione o sezione di tessuto o sull'intero tessuto. | L'IHC è una tecnica in cui vengono utilizzati anticorpi monoclonali e policlonali per determinare la presenza di antigeni, che sono speciali marcatori proteici posti sulle superfici cellulari. |
| Tipo di biomolecole analizzate | |
| ISH analizza gli acidi nucleici. | IHC analizza le proteine-antigeni. |
| Base della reazione biochimica | |
| In questa tecnica si verifica l'accoppiamento di basi complementari tra DNA-DNA o DNA-RNA. | Le interazioni antigene-anticorpo sono coinvolte nell'immunoistochimica. |
| Metodi di rilevamento legati agli enzimi | |
| I metodi di rilevamento legati agli enzimi non possono essere utilizzati in ISH. | I metodi di rilevamento legati agli enzimi possono essere utilizzati in IHC. |
Riepilogo: ibridazione in situ vs immunoistochimica
La diagnostica molecolare è un metodo rapido e di conferma che può essere utilizzato per identificare una malattia non trasmissibile come il cancro o una malattia trasmissibile come l'HIV o la tubercolosi sulla base dei marcatori molecolari presenti sulle cellule che portano alla manifestazione della malattia. I marcatori molecolari possono essere presenti sotto forma di proteine espresse oa livello genetico in base alle quali vengono introdotte diverse nuove tecniche per aumentare l'efficienza e sono meno laboriose, sebbene queste tecniche comportino un costo elevato. Quindi l'ISH dipende dalla formazione di ibridi DNA-DNA o DNA-RNA e l'IHC dipende dalle reazioni specifiche tra anticorpo e antigene. Questa è la differenza tra l'ibridazione in situ.
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