Differenza chiave - Immunofluorescenza vs Immunoistochimica
La diagnostica delle malattie, che utilizza metodi biologici molecolari, è diventata un'area emergente della tecnologia dei laboratori clinici. Comprende tutti i test e metodi per identificare una malattia e comprenderne la causa analizzando DNA, RNA o proteine espresse in un organismo. I rapidi progressi nella diagnostica molecolare hanno consentito la ricerca di base sulle malattie trasmissibili e non trasmissibili. Questi vengono utilizzati per determinare i cambiamenti nella sequenza o nei livelli di espressione in geni o proteine cruciali coinvolti nella malattia. L'immunofluorescenza (IF) e l'immunoistochimica (IHC) sono due tecniche così ampiamente utilizzate nella biologia del cancro. IF è un tipo di IHC in cui viene utilizzato un metodo di rilevamento della fluorescenza per analizzare gli anticorpi monoclonali e policlonali, mentre IHC utilizza metodi chimici per rilevare gli anticorpi monoclonali e policlonali. Questa è la differenza fondamentale tra IF e IHC.
CONTENUTI
1. Panoramica e differenza chiave
2. Che cos'è l'immunofluorescenza
3. Che cos'è l'immunoistochimica
4. Somiglianze tra immunofluorescenza e immunoistochimica
5. Confronto fianco a fianco - Immunofluorescenza vs immunoistochimica in forma tabulare
6. Riepilogo
Cos'è l'immunofluorescenza (IF)?
L'immunofluorescenza è una tecnica di rilevamento in cui gli anticorpi utilizzati nel test vengono etichettati utilizzando coloranti fluorescenti o proteine fluorescenti per lo scopo di rilevamento. Gli anticorpi secondari etichettati possono provocare segnali di fondo indesiderati; pertanto, la tecnica IF si basa attualmente sull'etichettatura dell'anticorpo primario stesso al fine di evitare segnali indesiderati durante il rilevamento. Attraverso questa tecnica, si previene il legame aspecifico tra l'anticorpo primario e quello secondario, ed è più rapido in quanto non è coinvolta alcuna fase di incubazione secondaria. Anche la qualità dei dati è migliorata.
Figura 01: doppia colorazione di immunofluorescenza per BrdU, NeuN e GFAP
I fluorocromi o coloranti fluorescenti sono composti che possono assorbire la radiazione, preferibilmente la radiazione ultravioletta che viene eccitata. Quando le particelle raggiungono lo stato fondamentale dallo stato eccitato, emettono radiazioni che vengono catturate e rilevate da un rilevatore per formare uno spettro. È di grande importanza che l'etichetta fluorescente sia compatibile e stabile per la particolare reazione e dovrebbe essere opportunamente coniugata all'anticorpo per ottenere risultati accurati. Uno dei fluorocromi più utilizzati è la fluoresceina isotiocianato (FITC), che è di colore verde, con lunghezze d'onda di picco di assorbimento ed emissione di 490 nm e 520 nm, rispettivamente. La rodamina, un altro agente utilizzato in IF, è di colore rosso e ha lunghezze d'onda di picco di assorbimento ed emissione distinte di 553 nm e 627 nm.
Cos'è l'immunoistochimica (IHC)?
L'IHC è un metodo di test molecolare praticato per identificare e confermare la presenza dell'antigene nella cellula bersaglio. La cellula bersaglio potrebbe essere una particella infettiva, un patogeno microbico o una cellula tumorale maligna. IHC utilizza anticorpi monoclonali e policlonali per determinare la presenza di antigeni presenti sulla superficie cellulare delle cellule bersaglio. La tecnica si basa sul legame antigene-anticorpo. A questi anticorpi viene coniugato un marker di rilevamento per rilevare la presenza o l'assenza del particolare antigene. Questi marcatori possono essere marcatori chimici come enzimi, anticorpi marcati con fluorescenza o anticorpi marcati con radio.
Figura 02: fetta di cervello di topo colorata mediante immunoistochimica
L'applicazione più popolare dell'IHC è nella biologia delle cellule tumorali per identificare la presenza di tumori maligni, ma è anche utilizzata per la rilevazione di malattie infettive.
Quali sono le somiglianze tra immunofluorescenza e immunoistochimica?
- L'immunofluorescenza e l'immunoistochimica si svolgono in condizioni in vitro.
- Entrambe le tecniche si basano sull'antigene-anticorpo
- Entrambe sono tecniche molto rapide.
- I risultati delle tecniche sono riproducibili.
- Entrambi hanno migliorato la qualità dei dati.
- Queste tecniche utilizzate nella diagnostica per cancro e malattie infettive.
Qual è la differenza tra immunofluorescenza e immunoistochimica?
Articolo diff. Al centro prima della tabella
Immunofluorescenza vs Immunoistochimica |
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| IF è una tecnica di rilevamento in cui gli anticorpi utilizzati nel test vengono etichettati utilizzando coloranti fluorescenti o proteine fluorescenti per il rilevamento. | L'IHC è una tecnica di rilevamento in cui gli anticorpi utilizzati nel dosaggio vengono etichettati utilizzando sostanze chimiche o elementi radioattivi per il rilevamento. |
| Precisione | |
| La precisione è maggiore nella tecnica IF rispetto a IHC. | La precisione è inferiore in IHC. |
| Specificità | |
| IF è più specifico. | IHC è meno specifico. |
Riepilogo - Immunofluorescenza vs Immunoistochimica
I meccanismi molecolari hanno determinato molti cambiamenti nel campo della medicina, dando vita a metodi avanzati di sperimentazione molecolare che hanno portato rivoluzioni nel campo della diagnostica. Queste invenzioni hanno portato a una rapida e accurata identificazione e conferma della malattia, consentendo così la somministrazione e la produzione di farmaci di successo. Queste tecniche sono utilizzate anche in farmacologia per trovare i bersagli dei farmaci e per confermare le proprietà farmacocinetiche del farmaco durante il metabolismo del farmaco. IF e IHC sono due metodi diagnostici basati sul concetto di legame dell'antigene e dell'anticorpo, sebbene la modalità di rilevamento in entrambe le tecniche differisca. IF utilizza il principio della fluorescenza per rilevare l'antigene e IHC utilizza il concetto di coniugazione chimica per rilevare l'antigene. Questa è la differenza tra IF e IHC.
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