Differenza chiave - Blunt vs Sticky End Ligation
Le endonucleasi di restrizione sono enzimi specifici che tagliano il DNA a doppio filamento (dsDNA). Sono anche conosciute come forbici molecolari in biologia molecolare. Gli enzimi di restrizione sono in grado di riconoscere brevi sequenze specifiche del dsDNA note come siti di riconoscimento e di scindere i legami fosfodiestere e idrogeno per aprire i doppi filamenti. Come risultato della scissione da parte di questi enzimi, i frammenti di DNA vengono prodotti con diversi tipi di estremità come estremità appiccicose e estremità smussate. La DNA ligasi è un enzima utilizzato in biologia molecolare per unire due filamenti adiacenti di DNA formando nuovi legami. Il passaggio è noto come legatura e, a seconda del tipo di estremità del DNA ligato, possono essere indicati come legatura dell'estremità smussata e legatura dell'estremità adesiva. La differenza fondamentale tra la legatura dell'estremità smussata e quella appiccicosa è quella la legatura dell'estremità smussata si verifica tra frammenti di DNA che contengono due estremità smussate mentre la legatura dell'estremità adesiva si verifica tra sporgenze di 5 'e 3'. Rispetto alla legatura dell'estremità smussata, la legatura dell'estremità adesiva è più efficiente e stabile.
CONTENUTO
1. Panoramica e differenza chiave
2. Cos'è la legatura smussata
3. Cos'è la legatura adesiva
4. Confronto affiancato - Legatura smussata e adesiva
5. Riepilogo
Cos'è una legatura smussata?
Alcune endonucleasi di restrizione possono tagliare il DNA alle basi opposte e produrre frammenti di DNA con estremità smussate. Questi enzimi sono noti come taglierine smussate; si attaccano direttamente al centro del sito di restrizione senza lasciare basi sporgenti a filamento singolo. Le estremità smussate sono anche conosciute come estremità non sporgenti poiché non hanno basi sporgenti 3 'e 5' alle estremità. Entrambi i fili terminano da coppie di basi con estremità smussate. Gli enzimi da taglio smussati comuni sono EcoRV HaeIII, AluI e SmaI.
La legatura delle estremità smussate è coinvolta tra due estremità smussate. Non è una legatura di basi sporgenti. Questa legatura è meno efficiente della legatura adesiva. Tuttavia, in alcune occasioni, la legatura dell'estremità smussata diventa più vantaggiosa della legatura dell'estremità adesiva, specialmente quando si legano i prodotti della PCR. I prodotti PCR sono sempre prodotti con estremità smussate. La legatura dell'estremità smussata non richiede estremità complementari nel DNA per la legatura.
Figura 01: produzione finale smussata dell'enzima Eco RV
Cos'è una legatura adesiva?
Alcune endonucleasi di restrizione sono in grado di tagliare il dsDNA, lasciando un pezzo sporgente di DNA a filamento singolo all'estremità. Queste estremità sono note come estremità appiccicose o sporgenti. La legatura delle estremità appiccicose si verifica tra due frammenti di DNA che contengono sporgenze corrispondenti perché le estremità appiccicose sono possedute con basi spaiate e richiedono basi complementari per formare legami. Quindi, è necessario utilizzare lo stesso enzima di restrizione per entrambe le fonti di DNA per produrre i frammenti di legatura corrispondenti.
La legatura adesiva è più efficiente ed è spesso altamente desiderabile nei processi di clonazione. Esistono diversi enzimi di restrizione che producono estremità appiccicose. Sono EcoRI, BamHI, HindIII ecc.
Figura 02: produzione finale appiccicosa da parte dell'enzima Eco RI
Qual è la differenza tra Blunt e Sticky End Ligation?
Articolo diff. Al centro prima della tabella
Blunt vs Sticky End Ligation |
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| La legatura dell'estremità smussata si verifica tra due frammenti di DNA smussati. | La legatura delle estremità appiccicose si verifica tra due frammenti di DNA corrispondenti con estremità appiccicose. |
| Enzimi | |
| Le frese con estremità smussate producono estremità smussate. | Le frese con estremità adesive producono estremità appiccicose o coesive. |
| Requisito di Matching Ends | |
| Non richiede frammenti corrispondenti o basi complementari. | Richiede basi complementari alle estremità per formare coppie di basi. |
| Efficienza | |
| È meno efficiente della legatura delle estremità appiccicose | È più efficiente della legatura a punta smussata. |
Riepilogo - Legatura smussata vs Sticky End
Le endonucleasi di restrizione sono in grado di fendere il dsDNA e produrre frammenti di DNA con estremità diverse. Riconoscono sequenze specifiche e limitano il DNA creando estremità appiccicose e smussate. Le estremità adesive hanno basi spaiate all'estremità dei frammenti. Le estremità smussate sono create a causa di una scollatura dritta e hanno coppie di basi alle estremità. La legatura dell'estremità adesiva richiede due pezzi di DNA a filamento singolo complementari. La legatura dell'estremità smussata si verifica tra due frammenti dell'estremità smussata. Questa è la differenza tra legatura smussata e appiccicosa.
