Differenza chiave - Gel impilabile vs Gel separatore
I termini gel di impilamento e gel di separazione vengono utilizzati per spiegare la tecnica SDS-PAGE. L'elettroforesi su gel SDS-PAGE o sodio dodecil solfato-poliacrilammide è una tecnica di laboratorio utilizzata per separare le molecole proteiche in base ai loro pesi molecolari. La teoria alla base della tecnica è che le proteine con pesi molecolari differenti mostrano velocità di migrazione differenti; le molecole a basso peso molecolare migrano più velocemente mentre le molecole ad alto peso molecolare migrano lentamente. Il mezzo per la migrazione è un gel. Esistono due tipi di gel denominati gel impilante e gel separatore. Il differenza fondamentale tra il gel di impilamento e il gel di separazione è che il pH del gel di impilamento è 6,8 mentre il pH del gel di separazione è 8,8.
CONTENUTI
1. Panoramica e differenza chiave
2. Che cos'è il gel impilabile
3. Che cos'è il gel separatore
4. Relazione tra gel impilabile e gel separatore
5. Confronto affiancato - Gel impilabile e gel separatore in forma tabulare
6. Riepilogo
Cos'è Stacking Gel?
Il gel di impilamento è un gel di poliacrilammide a bassa concentrazione che viene posizionato sopra un gel risolvente più concentrato (gel separatore) con la tecnica SDS-PAGE. Il gel di impilamento viene utilizzato per migliorare la risoluzione dell'elettroforesi. La risoluzione aumenta a causa della differenza tra le concentrazioni di gel di impilamento e gel di risoluzione che hanno effetto sulle proteine nel campione. Poiché la concentrazione di poliacrilammide nel gel di impilamento è bassa, la dimensione dei pori è maggiore. Questo aiuta anche ad aumentare la separazione.
Il gel di impilamento è un gel di poliacrilammide sciolto con grandi pori di circa il 7% di poliacrilammide. Questi pori non agiscono come una barriera considerevole per le grandi molecole proteiche. Quindi questo gel influisce leggermente sulla mobilità di quelle proteine. Ciò effettua la separazione in base alla mobilità e alle dimensioni delle proteine concentrandole tra due gel.
Figura 01: gel di acrilammide SDS-PAGE
Il pH del gel di impilamento è 6,8. Il suo pH è acido rispetto a quello del gel risolvente di 2 unità di pH. Questo pH implica una forza ionica inferiore e quindi una maggiore resistenza elettrica. Ciò provoca la mobilità delle proteine rispetto ad altre particelle cariche presenti nel gel.
Cos'è il gel separatore?
Il gel separatore o il gel risolutivo di una tecnica SDS-PAGE è un gel di poliacrilammide altamente concentrato che viene posizionato sopra il gel di impilamento a bassa concentrazione. Il gel separatore contiene un'elevata quantità di poliacrilammide (10%). Il pH di questo gel viene mantenuto come pH = 8,8, che è un livello di pH superiore a quello del gel di impilamento.
Figura 02: un apparato per elettroforesi su gel
Quando le molecole proteiche raggiungono il gel separatore, la migrazione di quelle molecole viene rallentata perché il gel separatore è un gel ad alta concentrazione con una piccola dimensione dei pori che può fungere da notevole barriera per il movimento delle molecole proteiche. Questo rallentamento consente alle altre proteine di migrare lentamente di recuperare, risultando in una banda stretta e concentrata tra i due gel.
Qual è la relazione tra il gel impilabile e il gel separatore?
Entrambi i tipi Stacking Gel e Separating Gel sono utilizzati nello stesso apparecchio
Qual è la differenza tra il gel impilabile e il gel separatore?
Articolo diff. Al centro prima della tabella
Gel impilabile vs Gel separatore |
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| Il gel di impilamento è un gel di poliacrilammide a bassa concentrazione che viene posizionato sopra un gel risolvente più concentrato (gel separatore) con la tecnica SDS-PAGE. | Il gel di separazione o il gel di risoluzione di una tecnica SDS-PAGE è un gel di poliacrilammide altamente concentrato che viene posizionato sopra un gel di impilamento a bassa concentrazione. |
| Posizionamento | |
| Il gel di impilamento viene posto sul gel di risoluzione (separatore). | Il gel separatore viene posizionato sul fondo del contenitore utilizzato per l'elettroforesi su gel. |
| Concentrazione | |
| La concentrazione del gel impilabile è alta. | La concentrazione del gel separatore è bassa. |
| Contenuto di poliacrilammide | |
| Il gel impilabile contiene circa il 7% di poliacrilammide. | Il gel separatore contiene circa il 10% di poliacrilammide. |
| pH | |
| Il pH del gel di impilamento è 6,8. | Il pH del gel separatore è 8,8. |
| Dimensione dei pori | |
| Grandi dimensioni dei pori sono presenti nel gel impilabile. | Piccole dimensioni dei pori sono presenti nel gel separatore. |
| Risoluzione | |
| Il gel impilabile offre una migliore risoluzione. | Il gel separatore dà una scarsa risoluzione. |
Riepilogo - Gel impilabile vs Gel separatore
Il gel di impilamento e il gel di separazione sono due tipi di gel di poliacrilammide utilizzati per ottenere una migliore separazione delle molecole proteiche in un dato campione. La differenza tra il gel di impilamento e il gel di separazione è che il pH del gel di impilamento è 6,8 mentre il pH del gel di separazione è 8,8.
