Differenza chiave: elettroforesi capillare vs elettroforesi su gel
L'elettroforesi è una tecnica utilizzata per separare le biomolecole in base alla carica delle particelle, alle dimensioni delle particelle e alla forma delle particelle. La migrazione della molecola, nota come mobilità elettroforetica, dipende dal tipo di polimero / gel utilizzato, dalla sua dimensione dei pori, dalla tensione fornita, dal tempo di esecuzione e dal rapporto superficie / volume. Esistono diversi tipi di tecniche di elettroforesi in base al tipo di biomolecola utilizzata. Il primo tipo di elettroforesi inventato è stato l'elettroforesi su carta in cui è stata utilizzata una carta di nitrocellulosa come mezzo per la separazione delle biomolecole. Il principio dell'elettroforesi su gel in cui sono stati utilizzati gel di dimensioni diverse per separare le biomolecole, è stato inventato in seguito. La tecnica di elettroforesi su gel è stata ulteriormente modificata per migliorare l'accuratezza della tecnica e una di queste modifiche è l'elettroforesi capillare. Il differenza fondamentale tra l'elettroforesi capillare e l'elettroforesi su gel è che l'elettroforesi su gel viene eseguita su un piano verticale o orizzontale utilizzando un gel polimerico di dimensioni standard dei pori mentre l'elettroforesi capillare viene eseguita in un tubo capillare con un liquido polimerico o un gel.
CONTENUTI
1. Panoramica e differenza chiave
2. Cos'è l'elettroforesi su gel
3. Cos'è l'elettroforesi capillare
4. Somiglianze tra elettroforesi capillare ed elettroforesi su gel
5. Confronto affiancato - Elettroforesi capillare vs elettroforesi su gel in forma tabulare
6. Riepilogo
Cos'è l'elettroforesi su gel?
L'elettroforesi su gel è una tecnica utilizzata per separare principalmente acidi nucleici, proteine o amminoacidi in base alla sua carica, dimensione e forma. Questa tecnica utilizza un gel fisico, che è una sostanza polimerica, come mezzo di separazione. I gel più comunemente utilizzati sono l'agarosio (per la separazione degli acidi nucleici) e il poliacrilammide (per la separazione delle proteine). L'apparato elettroforetico su gel contiene il vassoio di colata di gel per preparare il gel, pettini di colata per preparare i pozzetti, serbatoio tampone, elettrodi - positivo (anodo) e negativo (catodo) e l'unità di alimentazione della tensione. Molecole come DNA o RNA, che sono caricate negativamente, si spostano dal catodo all'anodo e le molecole caricate positivamente si muovono viceversa. La preparazione del gel viene eseguita secondo il requisito. Se è richiesta un'elevata risoluzione o separazione delle molecole,deve essere preparato un gel ad alta concentrazione con una dimensione dei pori minore. Le molecole separate sulla matrice gel vengono osservate dopo una tecnica di colorazione. Le molecole separate appaiono come bande sulla matrice del gel.
Figura 01: elettroforesi su gel
L'elettroforesi su gel viene utilizzata nella diagnostica molecolare come il fingerprinting del DNA per determinare la presenza di un particolare frammento di DNA / RNA o di una proteina. L'elettroforesi su gel determina anche la purezza del campione di biomolecola estratto. L'elettroforesi su gel viene eseguita come fase preliminare per l'ibridazione e come analisi di conferma dopo il sequenziamento.
Cos'è l'elettroforesi capillare?
L'elettroforesi capillare è una modifica dell'elettroforesi su gel che utilizza lo stesso principio di separazione basato sulla carica, le dimensioni della molecola, ma viene eseguita in un tubo capillare con una sostanza gel o un polimero liquido. I capillari sono preparati di silice fusa e ogni tubo capillare ha un diametro interno di 50-100 μm ed è lungo 25-100 cm. I campioni vengono iniettati nel tubo capillare contenente il materiale polimerico e vengono separati molto rapidamente rispetto all'elettroforesi su gel convenzionale. Il sistema capillare è ben protetto all'interno di una camicia isolante che protegge il campione da qualsiasi contaminazione. I capillari possono essere riempiti con polimeri liquidi come idrossietilcellulosa o gel ad alta risoluzione come poliacrilammide. L'elettroforesi capillare fornisce una maggiore risoluzione; quindi la separazione è più accurata. L'elettroforesi capillare utilizza un sistema di rilevamento automatico tramite analisi spettrofotometrica. Ciò è dovuto al maggiore rapporto tra superficie e volume.
Figura 02: elettroforesi capillare
L'elettroforesi capillare viene utilizzata in situazioni come in medicina legale dove è richiesta una maggiore precisione e non è comunemente utilizzata in quanto è una tecnica costosa.
Quali sono le somiglianze tra l'elettroforesi capillare e l'elettroforesi su gel?
- La separazione delle molecole in entrambe le tecniche si basa sulla carica e sulle dimensioni della molecola.
- Entrambe le tecniche possono essere utilizzate per separare sia gli acidi nucleici che le proteine.
- Il volume del campione di entrambe le tecniche è lo stesso.
- Entrambe le tecniche utilizzano un buffer per facilitare la separazione.
Qual è la differenza tra elettroforesi capillare ed elettroforesi su gel?
Articolo diff. Al centro prima della tabella
Elettroforesi capillare vs elettroforesi su gel |
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| L'elettroforesi capillare è una tecnica che separa biomolecole su un tubo capillare utilizzando un mezzo polimerico liquido o gel. | L'elettroforesi su gel è una tecnica che separa biomolecole su un piano verticale o orizzontale utilizzando un mezzo gel polimerico. |
| Separazione | |
| Nell'elettroforesi capillare, la separazione viene eseguita all'interno di un tubo capillare. | Nell'elettroforesi su gel, la separazione viene eseguita su un piano verticale o orizzontale. |
| Mezzo di separazione | |
| I polimeri liquidi come l'idrossietilcellulosa sono utilizzati nell'elettroforesi capillare. | I gel, sia agarosio che poliacrilammide, sono usati come mezzo nell'elettroforesi su gel. |
| Cross Linkage | |
| L'alta risoluzione può essere ottenuta dall'elettroforesi capillare. | La risoluzione è bassa nell'elettroforesi su gel. |
| Rapporto tra superficie e volume | |
| Il rapporto superficie / volume è elevato nell'elettroforesi capillare. | Il rapporto superficie / volume è basso nell'elettroforesi su gel. |
| Tecnica di rilevamento | |
| Il rilevamento viene effettuato tramite rivelatori automatici spettrofotometrici in elettroforesi capillare. | La colorazione e l'osservazione tramite transilluminatore UV vengono eseguite come tecniche di rilevamento nell'elettroforesi su gel. |
Riepilogo: elettroforesi capillare vs elettroforesi su gel
La diagnostica molecolare gioca un ruolo importante nel mondo scientifico. L'identificazione e la purificazione di DNA, RNA e proteine sono passaggi critici nelle procedure diagnostiche. L'elettroforesi è una tecnica che separa e identifica le biomolecole sia nell'elettroforesi su gel che nell'elettroforesi su gel capillare molto avanzata. L'elettroforesi su gel viene eseguita su un piano verticale o orizzontale utilizzando un gel polimerico di dimensioni standard dei pori mentre l'elettroforesi capillare viene eseguita in un tubo capillare con un liquido polimerico o un gel. Questa è la differenza tra l'elettroforesi capillare e l'elettroforesi su gel. Al completamento della tecnica di elettroforesi, le biomolecole vengono ulteriormente elaborate per ottenere informazioni di livello superiore tramite ibridazione o tramite tecniche come il fingerprinting.
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