Differenza chiave - T4 vs T7 DNA ligasi
La DNA ligasi è un importante enzima utilizzato nelle tecniche di biologia molecolare. Funziona come una colla molecolare per unire i nucleotidi formando legami fosfodiestere tra i nucleotidi. I legami fosfodiestere si formano tra l'estremità 3 'idrossile della parte zuccherina e il gruppo fosfato finale 5'. La DNA ligasi è vitale nel processo di replicazione per unire i frammenti di Okazaki del filamento in ritardo e durante i meccanismi di riparazione del DNA e gli esperimenti di clonazione in vitro per unire il gene di interesse desiderato al genoma del vettore. Ci sono due principali DNA ligasi utilizzate attualmente dai biologi molecolari: T4 e T7 DNA ligasi. La DNA ligasi T4 è uno dei primi enzimi ad essere isolato dal batteriofago T4. La DNA ligasi T7, che è una proteina più piccola, è un enzima isolato dal batteriofago T7. Questa è la differenza chiave tra le ligasi del DNA T4 e T7.
CONTENUTI
1. Panoramica e differenza chiave
2. Qual è l'azione della DNA ligasi
3. Che cos'è la DNA ligasi T4
4. Che cos'è la DNA ligasi T7
4. Somiglianze tra la DNA ligasi T4 e T7
5. Confronto fianco a fianco - T4 vs DNA ligasi T7 in forma tabulare
6. Riepilogo
Qual è l'azione della DNA ligasi?
La legatura del DNA avviene in una reazione in tre fasi. Il primo passo è un attacco nucleofilo all'alfa-fosforo dell'ATP che genera un intermedio enzima-adenilato covalente in cui l'AMP è legato all'azoto della catena laterale terminale della lisina. Nella seconda fase, si verifica un attacco nucleofilo sul fosforo dell'enzima adenilato da parte del substrato di DNA terminato con 5'-fosfato, rilasciando lisina e formando DNA-adenilato. Nella fase finale, il DNA-adenilato viene attaccato dal 3'- OH di un altro filamento di DNA, rilasciando AMP e unendosi ai polinucleotidi.
Che cos'è la DNA ligasi T4?
T4 Ligase è stata la prima ligasi ad essere isolata e identificata da Meselson, Weigle e Kellenberger ed è stata la prima ligasi commerciale prodotta. La DNA ligasi T4 è un enzima dipendente dall'ATP che catalizza la formazione del legame fosfodiestere. È una singola catena polipeptidica con 487 residui di amminoacidi e ha un peso molecolare di circa 77 kDa. Il pH ottimale per la sua attività è compreso tra 7,5 e 8.
Figura 01: T4 DNA ligasi
La DNA ligasi T4, come suggerisce il nome, è presente nel batteriofago T4 ed è stata isolata quando il fago ha prodotto l'enzima dopo l'infezione da E. coli. L'enzima lega i duplex di DNA a doppia elica con estremità smussate ei frammenti da legare dovrebbero essere in stretta vicinanza l'uno all'altro.
Cos'è la DNA ligasi T7?
La ligasi T7 è una proteina di 41 kDa prodotta dal batteriofago T7 ed è isolata infettando le cellule di E. coli. La funzione principale della ligasi T7 è quella di legare i duplex di DNA attraverso legami di fosfodiestere e unire i frammenti di DNA vicini durante gli esperimenti di clonazione. Il pH ottimale per la DNA ligasi T7 è compreso tra 7,0 e 7,2. La ligasi T7 dipende dall'ATP. Le ligasi del DNA T7 sono anche in grado di ricottare ibridi di DNA e RNA, dando luogo a conformazioni anomale durante la trascrizione; tuttavia, questo fenomeno è ancora oggetto di ricerca da parte di studi in vitro.
Quali sono le somiglianze tra la DNA ligasi T4 e T7?
- T4 e T7 DNA ligasi partecipano a una reazione di legatura mediante ricottura di duplex di DNA attraverso la formazione di legami fosfodiestere tra l'estremità 3 'OH e l'estremità 5' fosfato del frammento di DNA.
- Entrambi gli enzimi legano duplex di DNA a estremità smussata che sono in stretta vicinanza l'uno all'altro.
- Entrambi gli enzimi dipendono dall'ATP.
- Questi enzimi vengono isolati infettando le cellule di E. coli con il particolare batteriofago.
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Le applicazioni di entrambi gli enzimi includono:
- Clonazione molecolare - per legare il gene di interesse al vettore
- Riparazione del DNA - per riparare nicchie a doppio filamento
- Replicazione del DNA in vitro
- Reazione a catena della ligasi
Qual è la differenza tra la DNA ligasi T4 e T7?
Articolo diff. Al centro prima della tabella
T4 vs T7 DNA ligasi |
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| T4 DNA Ligasi tipo di DNA ligasi isolato dal batteriofago T4 ed è coinvolto nella legatura di frammenti di DNA adiacenti tramite la formazione di legami fosfodiestere. | T7 DNA Ligasi tipo di DNA ligasi isolato dal batteriofago T7 ed è coinvolto nella legatura di frammenti di DNA adiacenti tramite la formazione di legami fosfodiestere. |
| Dimensione della proteina | |
| La dimensione della DNA ligasi T4 è 77 kDa, maggiore rispetto alla DNA ligasi T7. | La dimensione della ligasi del DNA T7 è di 41 kDa. |
| PH ottimale | |
| L'intervallo di pH che funziona con la DNA ligasi T4 è 7,5 - 8,0. | L'intervallo di pH che funziona con la DNA ligasi T7 è 7,0 - 7,2. |
Riepilogo: T4 vs T7 DNA ligasi
Le ligasi del DNA sono un'importante classe di enzimi coinvolti nella clonazione molecolare per produrre molecole di DNA ricombinante contenenti il gene di interesse. La reazione di legatura è una reazione che utilizza energia e sono in corso nuovi studi di ricerca per migliorare l'accuratezza modulando le ligasi disponibili. Le DNA ligasi T4 e T7 sono due tipi di importanti enzimi DNA ligasi utilizzati nelle tecniche biologiche molecolari. Anche la DNA ligasi T7 è il risultato di una ricerca basata sulla ligasi primaria isolata da E. coli infetto da T4. T7 è raffigurato con maggiore efficienza e precisione nello svolgimento della sua funzione grazie alle sue dimensioni ridotte. Questa è la differenza tra T4 e T7 ligasi.
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