Differenza chiave - YAC vs M13 Phage Vector
La clonazione del DNA è un processo importante che consente la propagazione di importanti frammenti di DNA di organismi. Richiede l'unione di DNA specifico con DNA vettoriale per creare DNA ricombinante che si trasforma nell'organismo ospite. Un vettore è una molecola di DNA che si comporta come un veicolo per trasportare materiale genetico estraneo in un'altra cellula o organismo. Dovrebbe essere in grado di replicarsi all'interno dell'organismo ospite e produrre più copie di DNA ricombinante. Esistono diversi tipi di vettori utilizzati nella clonazione del DNA. Il cromosoma artificiale del lievito (YAC) e il vettore del fago M13 sono due tipi tra loro. Il differenza fondamentale tra YAC e il vettore del fago M13 è quello YAC è un cromosoma artificiale che si replica nelle cellule di lievito mentre il vettore del fago M13 è un DNA circolare a filamento singolo del batteriofago M13 che si replica nelle cellule E Coli.
INDICE
1. Panoramica e differenza chiave
2. Che cos'è YAC
3. Che cos'è il vettore fago M13
4. Confronto affiancato - YAC vs vettore fago M13
5. Riepilogo
Cos'è un vettore YAC?
YAC è un cromosoma costruito artificialmente che ha la capacità di trasportare un ampio segmento di DNA estraneo e replicarsi all'interno delle cellule di lievito. Ha sequenze centromere, telomere e replicanti autonomamente essenziali per la replicazione e la stabilità. Lo YAC dovrebbe inoltre recare uno o più marker selettivi e siti di restrizione per renderlo un vettore di clonazione efficace. Grandi sequenze che vanno da 1000 kb a 2000 kb possono essere inserite in YAC e trasferite nel lievito.
Figura 01: YAC Vector
Cos'è M13 Phage Vector?
Il batteriofago M13 è un virus che infetta e si replica in E Coli. Il genoma del batteriofago M13 è di piccole dimensioni, circa 6,7 kb. È un DNA a filamento singolo, circolare e con senso positivo. Questo virus infetta specificamente i batteri E Coli attraverso F pilus. Una volta che entra nel ssDNA nel batterio, sintetizza il suo filamento complementare e diventa dsDNA o la forma replicativa (RF) di M13. La RF può comportarsi come un plasmide all'interno dell'organismo ospite. Il dsDNA si replica all'interno di E Coli e produce ssDNA recanti nuovi fagi. Questi nuovi fagi vengono rilasciati continuamente dall'E Coli senza uccidere la cellula ospite. Tuttavia, l'infezione rallenta la crescita di E Coli. dsDNA può essere estratto da cellule batteriche e utilizzato come vettori nella clonazione del DNA. Sono conosciuti come vettori fagici M13. Possono essere facilmente manipolati e utilizzati in modo simile ai vettori plasmidici.
La capacità intrinseca di infezione di questi fagi M13 serve come una buona qualifica per essere utilizzato come vettore nella clonazione genica. Quando si sviluppa M13 in un vettore, diversi elementi dovrebbero essere incorporati nel suo genoma. Sono un gene per la proteina lac repressor (lac I), la regione prossimale dell'operatore del gene lac Z, un promotore lac e un sito di clonazione multipla (polylinker). Quando il dsDNA di M13 viene utilizzato come vettori, può essere trattato come un vettore plasmidico. Tuttavia, l'uso di ssDNA M13 presenta vantaggi nel sequenziamento del DNA e nella mutagenesi sito-diretta.
Poiché il vettore fago M13 porta più siti di clonazione nella regione lacZ, i vettori ricombinati possono essere facilmente identificati mediante lo screening della colonia blu / bianca su piastre di agar contenenti IPTG e X-Gal. Le placche blu prodotte sulle piastre non contengono i fagi ricombinati. Pertanto, i fagi con inserti possono essere selezionati per lo scopo della clonazione.
Figura 02: batteriofago M13
Qual è la differenza tra YAC e M13 Phage Vector?
Articolo diff. Al centro prima della tabella
YAC vs M13 Phage Vector |
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| YAC è un cromosoma geneticamente modificato che ha la capacità di trasportare un ampio segmento di DNA estraneo e replicarsi all'interno delle cellule di lievito. | Il vettore fago M13 è un vettore virale sviluppato dal batteriofago M13 che viene utilizzato per inserire DNA estraneo in E Coli. |
| Scopo | |
| Gli YAC sono stati progettati per clonare grandi frammenti di DNA genomico nel lievito. | I vettori del fago M13 vengono utilizzati per inserire DNA estraneo in E Coli. |
| Lunghezza inserto | |
| Gli YAC possono contenere inserti genomici di dimensioni megabase (1000 kb - 2000 kb). | La dimensione degli inserti è di circa 1.500 bps. |
| Costruzione | |
| Il DNA YAC è difficile da purificare intatto e richiede un'alta concentrazione per generare il sistema vettoriale YAC. | Si verifica tramite catena di elettroni fotosintetici ciclici. |
| Stabilità | |
| YAC è instabile. | I fagi M13 possono essere facilmente estratti. |
| Taglia | |
| Gli enzimi sono molecole più grandi. | I fagi M13 sono stabili di YAC. |
Riepilogo: YAC vs M13 Phage Vector
YAC è un sistema vettoriale costruito artificialmente che utilizza una regione specifica del cromosoma del lievito per inserire ampi segmenti di materiale genetico nelle cellule di lievito. Il vettore del fago M13 è un sistema vettoriale derivato dal batteriofago M 13 che utilizza l'E coli come organismo ospite. Questa è la principale differenza tra YAC e M13 Phage Vector. Entrambi sono ugualmente utili nella tecnologia del DNA ricombinante e nella clonazione genica.
