Differenza chiave - Gram Stain vs Acid Fast
I batteri sono microrganismi molto piccoli. Sono trasparenti e la loro individuazione è difficile in condizioni di vita e non macchiate. Pertanto, vengono sviluppati vari metodi di colorazione per facilitare il rilevamento dei batteri. Esistono tre tipi principali di tecniche di colorazione: colorazione semplice, colorazione differenziale e colorazione strutturale. La colorazione differenziale è una tecnica che utilizza più di una colorazione per differenziare i batteri. La colorazione di Gram e la colorazione acido-resistente sono più comunemente note come colorazioni differenziali. La colorazione di Gram è una tecnica di colorazione differenziale, che separa i batteri in due gruppi noti come batteri Gram-positivi e batteri Gram-negativi. La colorazione acido-resistente è una colorazione differenziale utilizzata per identificare organismi acido-resistenti come Mycobacterium da organismi non acido-resistenti. Questa è la differenza fondamentale tra la colorazione Gram e la colorazione Acid Fast.
CONTENUTI
1. Panoramica e differenza chiave
2. Cos'è Gram Stain
3. Cos'è Acid Fast
4. Somiglianze tra Gram Stain e Acid Fast
5. Confronto affiancato - Gram Stain vs Acid Fast in forma tabulare
6. Riepilogo
Cos'è Gram Stain?
La colorazione di Gram è un'importante tecnica di colorazione differenziale utilizzata per l'identificazione batterica in microbiologia. Questa tecnica è stata introdotta dal batteriologo danese Hans Christian Gram nel 1884. La colorazione di Gram classifica i batteri in due gruppi principali denominati gram positivi e gram negativi, che sono molto importanti nella classificazione e identificazione dei batteri. I microbiologi eseguono la colorazione di Gram come primo passo nella caratterizzazione batterica durante i loro studi.
I batteri sono raggruppati in base alle differenze nella loro parete cellulare. I batteri Gram positivi sono composti da uno spesso strato di peptidoglicano nella loro parete cellulare mentre i batteri gram negativi sono composti da un sottile strato di peptidoglicano nella loro parete cellulare. Il risultato della colorazione di Gram sarà basato sulla differenza di spessore dello strato di peptidoglicano della parete cellulare.
La colorazione di Gram viene eseguita utilizzando quattro diversi reagenti e cioè; colorante primario, mordente, decolorante e antimacchia. Crystal violet e safranina sono usati come coloranti primari e controcoloranti, rispettivamente mentre grammi di iodio e alcol al 95% sono usati rispettivamente come mordente e decolorante. I passaggi di base della colorazione dei grammi sono i seguenti;
- Uno striscio batterico viene preparato su un vetrino pulito, fissato a caldo e raffreddato.
- La macchia viene inondata di viola cristallino per 1 - 2 minuti.
- Lo striscio viene risciacquato con acqua di rubinetto che scorre lentamente per rimuovere le macchie in eccesso.
- I grammi di iodio vengono applicati allo striscio per 1 minuto.
- Lo striscio viene risciacquato con acqua di rubinetto che scorre lentamente
- Lo striscio viene lavato con alcol al 95% per 2-5 secondi e risciacquato con acqua di rubinetto a scorrimento lento.
- Lo striscio viene controcolorato con safranina per 1 minuto
- Lo striscio viene risciacquato con acqua di rubinetto che scorre lentamente, asciugato e osservato al microscopio.
Alla fine della colorazione dei grammi, i batteri gram negativi saranno osservati in colore rosa mentre i batteri grammi positivi saranno osservati in colore viola.
Figura 01: batteri Gram negativi e Gram positivi
Il risultato della colorazione dei grammi è deciso dallo spessore dello strato di peptidoglicano nella loro parete cellulare. Durante la fase di decolorazione, la macchia primaria e il mordente vengono facilmente rimossi dai batteri gram negativi e diventano incolori poiché hanno un sottile strato di peptidoglicano. La macchia primaria viene trattenuta nei batteri gram-positivi poiché hanno uno spesso strato di peptidoglicano. La controcolorazione non sarà efficace per i batteri gram-positivi a causa della ritenzione della macchia primaria. Pertanto, grammi di batteri positivi saranno visibili nel colore della macchia primaria, cioè il colore viola. La contro macchia macchierà i batteri gram negativi e saranno visibili nel colore scelto, che è il colore della safranina. Quindi, è facile classificare i batteri in due gruppi in base alla colorazione di grammo ed è prezioso nella differenziazione e identificazione batterica.
Cos'è Acid Fast?
La solidità agli acidi è una proprietà fisica di alcuni batteri, in particolare la loro resistenza alla decolorazione da parte degli acidi durante le procedure di colorazione. Una volta colorati, questi organismi resistono alle procedure di decolorazione a base di acido diluito e / o etanolo comuni in molti protocolli di colorazione. Pertanto, il nome "acido rapido" viene dato a questi organismi. Questa proprietà è dimostrata dall'avere un alto livello di materiale ceroso (acidi micolici) nelle pareti cellulari. Questo test è fondamentale per l'identificazione del Mycobacterium tuberculosis.
Figura 2: micobatteri acido resistenti
Questo colorante acido rapido è stato sviluppato da Paul Ehrlich nel 1882. La tecnica acido rapida di Ehrlich è stata modificata da Ziehl-Neelsen ed è ora utilizzata più frequentemente. La procedura di colorazione rapida acida prevede tre diversi reagenti. Carbol fuschin è usato come macchia primaria. L'alcol acido è usato come agente decolorante. Il blu di metilene è usato come contro macchia. La procedura di colorazione viene eseguita come segue.
- La colorazione primaria (carbol fuchsin) viene applicata al campione fissato sul vetrino (tutte le cellule saranno colorate in rosso).
- Il vetrino viene riscaldato mediante cottura a vapore per 5 minuti, che spinge correttamente le macchie nelle cellule.
- Quindi viene aggiunta la soluzione decolorante (questo rimuove il colorante rosso da tutte le cellule eccetto i batteri acido resistenti).
- Il blu di metilene viene aggiunto come controcolorante (colora tutte le cellule batteriche decolorate).
- I batteri acido-resistenti rimangono rossi mentre i batteri non acidi veloci si colorano di blu.
Quali sono le somiglianze tra Gram Stain e Acid Fast?
- La colorazione Gram e Acid fast sono due tecniche di colorazione differenziale.
- Entrambe le tecniche classificano i batteri in due gruppi.
- Entrambe le tecniche utilizzano due coloranti e uno decolorante.
Qual è la differenza tra Gram Stain e Acid Fast?
Articolo diff. Al centro prima della tabella
Colorazione di Gram vs Acid Fast |
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| La colorazione di Gram è una tecnica di colorazione differenziale, che separa i batteri in due gruppi di batteri Gram-positivi e batteri Gram-negativi. | La colorazione Acid Fast è una colorazione differenziale utilizzata per identificare organismi acido-resistenti da organismi non acido-resistenti. |
| Colorazione primaria | |
| Il violetto di cristallo è la macchia primaria comunemente usata nella colorazione di Gram. | Carbol fuchsin è il colorante principale utilizzato nell'acido rapido. |
| Agente decolorante | |
| L'alcol al 95% viene utilizzato come agente decolorante nella colorazione dei Gram. | L'alcol acido è usato come agente decolorante in acido rapido. |
| Counter Stain | |
| La colorazione di Gram utilizza la safranina come controcolorante. | La colorazione resistente agli acidi utilizza il blu di metilene come contro-macchia. |
| Osservazione | |
| I batteri Gram negativi sono osservati nel colore scelto e i batteri gram positivi sono osservati nel colore viola. | I batteri Acid Fast sono osservati nel colore rosso e i batteri non acidi veloci sono osservati nel colore blu. |
Riepilogo - Gram Stain vs Acid Fast
La visualizzazione dei microrganismi nello stato di vita è difficile. Pertanto, le macchie biologiche e le procedure di colorazione sono ampiamente utilizzate per studiarne le proprietà. La colorazione differenziale è un tipo di tecnica di colorazione utilizzata per differenziare i batteri. La colorazione di Gram e la colorazione acido-resistente sono due tecniche di colorazione differenziale. La colorazione di Gram differenzia i batteri gram negativi dai batteri gram positivi in base allo spessore delle loro pareti cellulari. La colorazione acido-rapida differenzia i batteri acido-resistenti dai batteri non acidi veloci in base al contenuto di acido micolico nella parete cellulare. Questa è la differenza tra acido rapido e colorazione di Gram.
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