Differenza chiave - Tripsinizzazione calda vs fredda
La tripsinizzazione calda e fredda sono due metodi utilizzati nella disaggregazione enzimatica delle cellule nella coltura di cellule animali. La differenza fondamentale tra tripsinizzazione calda e fredda, come suggeriscono i nomi, dipende dalla temperatura alla quale viene aggiunta la tripsina per la disaggregazione cellulare. La tripsinizzazione calda avviene in condizioni di temperatura più elevata (36,5 - 37 ° C) mentre la tripsinizzazione a freddo avviene in condizioni di bassa temperatura.
Durante il processo di coltura cellulare primaria di cellule animali, ci sono tre metodi principali utilizzati e si sono dimostrati efficaci. I tre metodi includono la disaggregazione meccanica delle cellule, la disaggregazione enzimatica delle cellule e la tecnica di espianto primario. La disaggregazione enzimatica delle cellule che porta all'isolamento delle cellule ed è effettuata dall'enzima di degradazione delle proteine tripsina. Pertanto, questo processo è noto come tripsinizzazione. La tripsinizzazione può essere eseguita in due diverse condizioni, vale a dire tripsinizzazione calda e tripsinizzazione fredda. La tripsinizzazione calda è il metodo per trattare le cellule con tripsina in condizioni calde a una temperatura di 36,5 - 37 0C. La tripsinizzazione a freddo è il processo di trattamento della tripsina che avviene in condizioni più fredde preferibilmente in ghiaccio mantenendo temperature molto basse.
CONTENUTI
1. Panoramica e differenze chiave
2. Cos'è la tripsinizzazione calda
3. Cos'è la tripsinizzazione fredda
4. Somiglianze tra tripsinizzazione calda e fredda
5. Confronto affiancato - Tripsinizzazione calda e fredda in forma tabulare
6. Riepilogo
Cos'è la tripsinizzazione calda?
La tripsinizzazione può essere eseguita per disaggregare i componenti cellulari al fine di isolare le cellule per produrre una coltura cellulare primaria. La tripsina è un enzima di degradazione delle proteine e la miscela di enzimi utilizzata nella tripsinizzazione può essere un estratto grezzo o un prodotto purificato. Si dice che l'estratto grezzo sia più efficiente nella lisi delle proteine e nella disintegrazione cellulare poiché contiene altri enzimi degradativi.
La tripsinizzazione a caldo è il metodo enzimatico più comunemente utilizzato per la disaggregazione cellulare che avviene in condizioni di temperatura più elevata. Prima del trattamento mediante tripsinizzazione, il tessuto desiderato viene tagliato in pezzi più piccoli. Facilita il facile processo di disaggregazione. Il tessuto tritato viene quindi lavato in un mezzo speciale noto come mezzo di dissezione del sale basale.
Al termine della fase di lavaggio, le cellule vengono trasformate in un pallone contenente l'enzima attivo, la tripsina. Poiché questa tecnica implica un protocollo di tripsinizzazione a caldo, la tripsina viene posta a una temperatura di circa 37 ° C per circa quattro ore.
Figura 01: tripsina
I contenuti vengono miscelati e agitati utilizzando metodi di centrifugazione per la facilità del protocollo e per accelerare il processo di disaggregazione. Una volta raggiunto il tempo consigliato, le cellule possono essere derivate dal supernatante. Le cellule derivate dal supernatante vengono quindi incubate a una temperatura e a un tempo particolari.
Cos'è la tripsinizzazione fredda?
La tripsinizzazione a freddo è l'altro tipo di tripsinizzazione che avviene in condizioni di freddo. In questa tecnica, le cellule che vengono tritate e lavate vengono poste in fiale su ghiaccio e poi imbevute di tripsina. Il periodo di ammollo è molto più lungo - circa 6-24 ore.
Dopo il completamento della procedura di ammollo, la tripsina viene rimossa dal lisato cellulare e i pezzi di tessuto vengono ulteriormente incubati a 37 ° C per circa 20-30 minuti. La disaggregazione delle cellule è determinata da ripetuti pipettamenti della miscela di tessuti. Ciò consentirà alle cellule di dissociarsi dalla membrana e arrivare al supernatante. Una volta che le cellule sono nel supernatante, vengono incubate e coltivate alla temperatura e al periodo di tempo desiderati.
Il metodo di tripsinizzazione a freddo presenta diversi vantaggi
- Maggiore resa di cellule vitali poiché il danno cellulare è ridotto al minimo. Il danno cellulare è ridotto al minimo non utilizzando fasi di centrifugazione.
- Metodo altamente conveniente.
- Meno laborioso.
La principale limitazione del metodo di tripsinizzazione a freddo è che grandi quantità non possono essere utilizzate in un caso.
Quali sono le somiglianze tra tripsinizzazione calda e fredda?
- Entrambi i processi di tripsinizzazione calda e fredda utilizzano l'enzima tripsina per la disaggregazione delle cellule.
- Entrambi i processi di tripsinizzazione calda e fredda sono utilizzati nelle procedure di coltura cellulare per la disaggregazione delle cellule.
- In entrambe le procedure di trattamento della tripsinizzazione calda e fredda, le cellule derivano dal surnatante.
Qual è la differenza tra tripsinizzazione calda e fredda?
Articolo diff. Al centro prima della tabella
Tripsinizzazione calda vs fredda |
|
| La tripsinizzazione calda è il metodo per trattare le cellule con tripsina in condizioni calde a una temperatura di 36,5 - 37 0. | La tripsinizzazione a freddo è il processo di trattamento della tripsina che avviene in condizioni più fredde preferibilmente in ghiaccio mantenendo temperature molto basse. |
| Protocollo | |
| I pezzi di tessuto sminuzzati vengono mantenuti a 37 ° C continuamente per tutta la procedura. | I pezzi di tessuto sminuzzato vengono inizialmente mantenuti a temperature gelide e quindi mantenuti a 37 0. |
| Temperatura | |
| La tripsinizzazione calda si verifica a 36,5 - 37 0 | La tripsinizzazione a freddo si verifica a temperature gelide. |
| Tempo consumato | |
| Minor tempo richiesto per l'intero processo (circa 4 ore) di tripsinizzazione a caldo. | Tempo richiesto più lungo (circa 6 - 24 ore) per la tripsinizzazione a freddo. |
| Resa di cellule vitali | |
| Basso livello di tripsinizzazione calda. | Alto contenuto di tripsinizzazione a freddo. |
| Uso della centrifugazione | |
| La centrifugazione è necessaria per la disaggregazione delle cellule nella tripsinizzazione calda. | La centrifugazione non è richiesta nella tripsinizzazione a freddo. |
| Quantità iniziale di tessuto per tripsinizzazione | |
| Una maggiore quantità di tessuto può essere utilizzata nella tripsinizzazione calda. | Una quantità minore di tessuto può essere utilizzata nella tripsinizzazione a freddo. |
| Danno cellulare | |
| Alto a causa della centrifugazione nella tripsinizzazione calda. | Meno a causa della tripsinizzazione a freddo. |
Riepilogo: tripsinizzazione calda vs fredda
La tripsinizzazione è il metodo di utilizzo dell'enzima di degradazione delle proteine tripsina per la disaggregazione e la preparazione di colture cellulari primarie durante il processo di coltura cellulare. Esistono due tecniche principali di tripsinizzazione basate sulle temperature utilizzate durante la procedura. Sono tripsinizzazione calda e fredda. La tripsinizzazione calda viene eseguita a 37 ° C mentre la tripsinizzazione fredda viene eseguita in condizioni gelide. Sebbene la tripsinizzazione a freddo richieda più tempo per il completamento, si dice che abbia una maggiore resa di cellule vitali. Ciò è dovuto al fatto che il danno cellulare è ridotto al minimo nella tripsinizzazione a freddo poiché non utilizza fasi di centrifugazione vigorose. Questa è la differenza tra tripsinizzazione calda e fredda.
