Differenza chiave - Citometria a flusso vs FACS
Nel contesto della teoria cellulare, le cellule sono l'unità strutturale e funzionale di base di tutti gli organismi viventi. Lo smistamento cellulare è una metodologia che viene utilizzata per separare cellule diverse in base alle caratteristiche fisiologiche e morfologiche. Possono avere caratteristiche intracellulari o extracellulari. L'interazione di DNA, RNA e proteine sono considerate proprietà interattive intracellulari mentre la forma, le dimensioni e le diverse proteine di superficie sono considerate proprietà extracellulari. Nella scienza moderna, le metodologie di smistamento delle cellule hanno portato ad assistere le diverse indagini negli studi biologici e anche nella definizione di nuovi principi attraverso la ricerca sulla medicina. Lo smistamento cellulare è condotto su varie metodologie che includono sia primitive con meno attrezzature sia metodologie tecnologiche avanzate con l'uso di macchinari sofisticati. Citometria a flusso, smistamento di cellule attivate fluorescenti (FACS), selezione di cellule magnetiche e smistamento di singole cellule sono le principali metodologie utilizzate. La citometria a flusso e FACS sono sviluppati per differenziare le cellule in base alle loro proprietà ottiche. FACS è un tipo specializzato di citometria a flusso. La citometria a flusso è una metodologia che viene utilizzata durante l'analisi di una popolazione eterogenea di cellule secondo diverse molecole di superficie cellulare, dimensioni e volume che consente l'indagine di singole cellule. FACS è un processo mediante il quale una miscela campione di cellule viene ordinata in base alle loro caratteristiche di diffusione della luce e fluorescenza in due o più contenitori. Questa è la differenza chiave tra citometria a flusso e FACS.
CONTENUTI
1. Panoramica e differenza chiave
2. Che cos'è la citometria a flusso
3. Che cos'è la FACS
4. Somiglianze tra citometria a flusso e FACS
5. Confronto affiancato - Citometria a flusso vs FACS in forma tabulare
6. Riepilogo
Cos'è la citometria a flusso?
La citometria a flusso è un metodo utilizzato per esaminare e determinare l'espressione di molecole intracellulari e la superficie cellulare e per definire e caratterizzare tipi cellulari distinti. Viene anche utilizzato per determinare il volume e la dimensione delle cellule e per valutare la purezza delle sottopopolazioni isolate. Ciò consente la valutazione multiparametrica di singole celle all'incirca nello stesso momento. La citometria a flusso viene utilizzata per misurare l'intensità della fluorescenza prodotta a causa di anticorpi marcati in modo fluorescente che aiutano a identificare proteine o ligandi che si legano alle cellule associate.
Figura 01: citometria a flusso
In generale, la citometria a flusso comprende principalmente tre sottosistemi. Sono la fluidica, l'elettronica e l'ottica. Nella citometria a flusso sono disponibili cinque componenti principali che vengono utilizzati nell'ordinamento cellulare. Sono, una cella di flusso (un flusso di liquido che viene utilizzato per trasportarli e allineare le celle per il processo di rilevamento ottico), un sistema di misurazione (può essere di diversi sistemi tra cui, lampade al mercurio e allo xeno, ad alta potenza raffreddate ad acqua o laser a bassa potenza raffreddati ad aria o laser a diodi), un ADC; Sistema di conversione da analogico a digitale, sistema di amplificazione e un computer per l'analisi. L'acquisizione è il processo mediante il quale i dati vengono raccolti dai campioni utilizzando il citometro a flusso. Questo processo è mediato da un computer collegato al citometro a flusso. Il software presente nel computer analizza le informazioni fornite al computer dal citometro a flusso. Il software ha anche la capacità di regolare i parametri dell'esperimento controllando il citometro a flusso.
Cos'è FACS?
Nel contesto della citometria a flusso, l'ordinamento cellulare attivato da fluorescenza (FACS) è un metodo utilizzato per differenziare e smistare un campione di una miscela di cellule biologiche. Le celle sono separate da due o più contenitori. Il metodo di ordinamento si basa sulle caratteristiche fisiche della cellula che include la diffusione della luce e le caratteristiche di fluorescenza della cellula. Si tratta di una tecnica scientifica importante, che può essere utilizzata per ottenere risultati quantitativi e qualitativi affidabili dei segnali di fluorescenza emessi da ciascuna cellula. Durante FACS, inizialmente, la miscela di cellule pre-ottenuta; una sospensione è diretta al centro di uno stretto flusso di liquido che scorre rapidamente. Il flusso del liquido è progettato in modo da separare le cellule nella sospensione in base al diametro di ciascuna cella. Un meccanismo di vibrazione viene applicato al flusso di sospensione che provoca la formazione di singole goccioline.
Figura 02: FACS
Il sistema è calibrato in modo da creare una singola goccia con una cella. Appena prima della formazione delle goccioline, la sospensione di flusso si muove lungo un apparato di misurazione della fluorescenza che rileva la caratteristica di fluorescenza di ciascuna cellula. Nel punto di formazione delle goccioline, viene posizionato un anello di carica elettrica che viene indotta una carica all'anello prima della misurazione dell'intensità della fluorescenza. Una volta che le goccioline si sono formate dal flusso di sospensione, una carica viene intrappolata all'interno delle goccioline che quindi entra in un sistema di deflessione elettrostatica. A seconda della carica, il sistema devia le goccioline in diversi contenitori. Il metodo di applicazione della carica varia a seconda dei diversi sistemi utilizzati in FACS. L'apparecchiatura utilizzata in FACS è nota come selezionatore di cellule attivate a fluorescenza.
Qual è la somiglianza tra citometria a flusso e FACS?
La citometria a flusso e FACS sono sviluppati per differenziare le cellule in base alle loro proprietà ottiche
Qual è la differenza tra citometria a flusso e FACS?
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Citometria a flusso vs FACS |
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| La citometria a flusso è una metodologia che viene utilizzata durante l'analisi di una popolazione eterogenea di cellule secondo diverse molecole di superficie cellulare, dimensioni e volume che consente l'indagine di singole cellule. | FACS è un processo mediante il quale una miscela campione di cellule viene ordinata in base alle loro caratteristiche di diffusione della luce e fluorescenza in due o più contenitori. |
Riepilogo - Citometria a flusso vs FACS
La cellula è l'unità strutturale e funzionale di base di tutti gli organismi viventi. L'ordinamento cellulare è il processo mediante il quale le cellule vengono isolate e differenziate in diverse categorie in base alle loro proprietà intracellulari ed extracellulari. La citometria a flusso e FACS sono due importanti metodologie nell'ordinamento cellulare. Entrambi i processi sono sviluppati per differenziare le cellule in base alle loro proprietà ottiche. La citometria a flusso è una metodologia che viene utilizzata durante l'analisi di una popolazione eterogenea di cellule secondo diverse molecole di superficie cellulare, dimensioni e volume che consente l'indagine di singole cellule. FACS è un processo mediante il quale una miscela campione di cellule viene ordinata in base alle loro caratteristiche di diffusione della luce e fluorescenza in due o più contenitori. Questa è la differenza tra citometria a flusso e FACS.
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